性病的实验室检测一

世界卫生组织(WHO)将性病分类为四级:一级性病:艾滋病;二级性病:梅毒、淋病、软下疳、性病性淋巴肉芽肿、腹股沟肉芽肿、非淋菌性尿道炎、性病性衣原体病、泌尿生殖道支原体病、滴虫性阴道炎、细菌性阴道炎、性病性阴道炎、性病性盆腔炎;三级性病:尖锐湿疣、生殖器疱疹、阴部念珠菌病、传染性软疣、阴部单纯疱疹、加特纳菌阴道炎、性病性肝周炎、瑞特氏综合症、B群佐球菌病、乙型肝炎、疥疮、阴虱病、人巨细胞病毒病;四级性病:梨形鞭毛虫病、弯曲杆菌病、阿米巴病、沙门氏菌病、志贺氏菌病。梅毒、艾滋病是我国重点防治的性传播疾病,那么他们是怎么进行实验室检测的呢?第一部分梅毒梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种性病,可侵犯全身脏器和器官而产生多种症状。但也可呈无症状的潜伏梅毒。梅毒主要通过性接触传染,极少数可通过污染的生活用具传播,未经治疗的梅毒孕妇可通过胎盘传染胎儿。梅毒螺旋体为一种小而纤细的螺旋状微生物,长为6-14μm,直径0.25-0.3μm,平均有8-14个规则的密螺旋。因不易被染色又称为苍白螺旋体,在暗视野显微镜下可以观察到其特征:螺旋整齐且数目固定;折光性强,较其他螺旋体亮;运动缓慢而有规律人是梅毒螺旋体的唯一自然宿主。尚不能体外培养繁殖,目前只能将其接种于家兔睾丸内来保存和传代。最适生存温度是37℃,在体外不易存活,利用煮沸、干燥、肥皂水以及一般的消毒剂(如过氧化氢溶液、乙醇)很容易将其杀死。在血液中4℃经3日可死亡。梅毒的自然病程与临床表现可见下图:梅毒的实验室检测技术有:(1)病原学检测(暗示野,镀银染色,免疫荧光,PCR等);(2)血清学检测(非梅毒螺旋体抗原血清学试验,梅毒螺旋体抗原血清学试验);(3)分子生物学检测;(4)蛋白印迹法(WesternblotsImmunoblots)。一、病原学检测暗视野显微镜检查法:渗出液混于盐水中,暗示野镜观察,可见典型梅毒螺旋体和特殊运动方式。镀银染色:梅毒螺旋体具有亲银性,可被银溶液染色,从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体。WHO推荐暗示野镜检诊断早期梅毒,早于抗体出现前数日至数周。PCR敏感性特异性高,适宜早期诊断。注意:取材时应取到组织渗出液,并尽量避免出血以提高阳性率;取材后应立即置暗视野镜下观察;暗视野检查要观察到梅毒螺旋体的特征性形态和运动方式,注意与其他螺旋体相区别;染色法要观察到梅毒螺旋体的典型形态。二、血清学检查血清学试验包括:非梅毒螺旋体抗原血清学试验(VDRL、USR、RPR、TRUST)及梅毒螺旋体抗原血清学试验(FTA-ABS、TPHA、TPPA、ELISA、TP-RT、19-sIgM、化学发光)。1非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理:梅毒螺旋体破坏宿主细胞释放以及其螺旋体细胞表面释放的类脂物质,刺激机体产生抗类脂抗体(反应素)。在体外该抗体与心磷脂、卵磷脂和胆固醇组成的抗原反应,形成凝集反应。方法:VDRL(venerealdiseaseresearchlaboratorytest);USR(unheatedserumreagintest);RPR(rapidplasmareagincirclecardtest);TRUST(tolulizedredunheatedserumtest)应用:现症梅毒的诊断;疗效判断:3个月1次,后半年1次。早期梅毒滴度下降快、甚至消失,滴度升高4倍考虑复发。快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)定性试验:50ul血清或血浆+1滴RPR试剂,混旋8分钟,判断结果。定量试验:50ul生理盐水+倍比稀释标本+1滴RPR试剂,混旋8分钟,判断结果。结果判断:出现凝集为阳性;出现凝集的最高稀释度为滴度。注意:不同的方法间结果可比性差.前带现象:(最少做到1:16)血清固定生物学假阳性一般人群1%-3%假阳性,滴度1:4。(但高滴度时梅毒感染可能性大)。引起非梅毒血清学试验假阳性的常见原因:感染因素:细菌性心内膜炎软下疳病毒性肝炎传染性单核细胞增多症结核、麻风、麻疹、疟疾等支原体或肺炎球菌肺炎其他螺旋体感染:雅司、品他非感染因素:妊辰,吸毒,恶性肿瘤,结缔组织病(SLE),多发性骨髓瘤,慢性肝损伤,衰老。2梅毒螺旋体抗原血清试验原理:基于TP特异性抗原,检测TP抗体方法:包括凝集法(TPHA,TPPA2.FTA-ABS);ELISA;19sIgM;TP-RT(胶体金法);化学发光。(1)TPPA/TPHA原理:超声裂解TP抗原,致敏明胶颗粒/家禽RBC,与血清中抗TP抗体结合,发生凝集反应。临床:梅毒确证注意:存在交叉抗原(1:80)可疑结果如:类风湿关节炎、自身免疫疾病等低滴度时候,FTA-ABS确证(2)FTA-ABS(fluoresenttreponemalantibodyabsorptiontest)原理:血清经吸收剂去非特异性抗体,与TP反应,形成Ab+Ag复合物;再加FITC标记的抗人IgG/IgM抗体,形成荧光复合物,荧光镜下TP呈苹果绿色荧光。临床:高度特异,最可靠确证试验。(3)ELISA原理:TP特异性抗原包备酶标板,与血清中TP抗体结合,加入酶标抗体,底物显色。临床:用于梅毒筛查。注意:高敏感性,特异较差。(4)19sIgM19sIgM原理:ELISA,WB等临床:早期梅毒诊断(5)TP-RT胶体金法临床:筛查注意:高敏感性,特异较差(6)化学发光法微粒子免疫检测法原理:CMIA是将重组梅毒螺旋体抗原(TpN15、TpN17和TpN47)包被于微粒子,通过该微粒子与检验标本稀释液混合,这时标本中存在的梅毒抗体将结合到梅毒螺旋体抗原包被的微粒子上。冲洗后,加入吖啶酯标记抗人IgG/抗IgM结合物。再次冲洗,在反应混合物中加入预激发液和激发液,然后测定化学发光反应的结果。临床:用于早期梅毒注意:高特异性、高灵敏度(结果在5.0以下要TPPA复查)注意:非抗梅疗效指标梅毒孕妇的新生儿,母体的梅毒抗体可在新生儿体内存留15月。假阳性:其他疾病或感染造成生物学假阳性。治疗与否该抗体终生存在,仅有15-25%一期梅毒患者治疗后2-3年后转阴。引起梅毒血清学试验假阳性的常见原因:感染因素:传染性单核细胞增多症麻风疟疾莱姆病非感染因素:系统性红斑狼疮甲状腺炎三、梅毒血清学检测的应用1.非梅毒血清学试验:现症梅毒诊断疗效判断:3个月1次,后半年1次。早期梅毒滴度下降快,晚期或不变。滴度4倍考虑复发。2.梅毒血清学试验:梅毒诊断:排除非特异性试验的假阳性早期诊断:出现早,可用于梅毒的筛查1一期梅毒方法学选择皮损中病原体检查常为阳性,极早期诊断.非梅毒螺旋体抗体常为阴性或弱阳性(1:8)梅毒螺旋体抗体常为阴性或弱阳性(1:)血清学筛查策略:特异性+非特异性提高检出率单次阳性结果应结合临床病史慎重诊断,阴性并不能排除梅毒,需连续观察抗体滴度↑。IgM抗体早于IgG抗体,常为阳性反应2二期梅毒实验室诊断方法选择皮损暗视野检测绝大多数可检测到螺旋体,但由于血清学方法的简单性,而检测较少。非梅毒螺旋体抗体%阳性,且滴度1:32梅毒螺旋体抗体%敏感性与98%特异性,且滴度通常TRUST或TPPA均可选择3三期梅毒实验室诊断方法学选择晚期梅毒的皮损中,极难找到TP。非梅毒螺旋体抗体71%阳性,梅毒螺旋体抗体96%阳性脑脊液WBC、蛋白、VDRL阳性。4孕妇梅毒的筛查---预防和发现先天梅毒的关键孕妇梅毒筛查:妊娠期或分娩时至少做一次梅毒血清学试验。注意:IgM检测在诊断先天梅毒时有重要的意义,但早期的治疗可使新生儿IgM消退,故IgM阴性不能排除先天梅毒。国家标准:最新加入随访18个月TPPA阳性者为先天梅毒。先天梅毒实验室诊断需要结合临床综合分析5神经梅毒引起脑(脊)膜血管,神经实质(神经细胞及其突起和神经胶质等损害)。早期梅毒常常累及中枢神经系统,CSF异常改变通常是短暂的,但一些未治疗的患者可持续性异常。晚期神经梅毒占梅毒患者10%,多在感染后3-20年发病。晚期神经梅毒代表着早期梅毒侵犯的继续。19-SIgM测定:由于血脑屏障作用,是诊断神经梅毒较特异的指标,但敏感性尚待探讨。TP-DNA检测敏感性高,但不适于判断病程及疗效。三、梅毒抗体检测结果报告和解释第二部分艾滋病且听下回分解。。。。。。

编辑:Pamedlabdzh

鸡汤时刻两个特殊人群的梅毒诊断老年人:老年人群(特别是80岁以上)的梅毒抗体阳性率要高于其他人群但许多梅毒螺旋体抗原血清试验和/或非梅毒螺旋体抗原血清试验呈阳性的老年病例并没有明显的临床症状。这可能是既往感染或隐性感染的情况,也可能是检测方法的假阳性所致,但一般情况下很难明确区分。实验室应明确记录检测结果,并建议临床根据实际情况进行处理。孕妇:晚期妊娠时,少数情况下可突然出现梅毒特异性抗体和/或反应素阳性,应提醒临床注意既往梅毒感染复发或假阳性的可能性,并进行随访观察。特异性抗体出现早,早期诊断;终身存在,不能判现症。非特异性抗体治疗后降低,疗效判读、现症诊断医院检验科诚信服务、精益求精、科学高效、满意放心







































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