主要根据病史、有婚外性接触史或配偶感染史结合，临床表现而做出初步诊断。必要时应结合实验室检查结果，综合判断，作出诊断。
1病毒培养HSV细胞培养阳性是病原学检查的金标准，从皮损处取标本作病毒培养，发现有单纯疱疹病毒和细胞病变。
2抗原检测从皮损处取标本，以单克隆抗体直接荧光法或酶联免疫吸附法(ELISA)检测单纯疱疹病毒抗原。
3核酸检测PCR可检测HSV-DNA，其意义与抗原检测相似，但敏感性更高。
4细胞学检查以玻片在疱底作印片，Wright染色或Giemsa染色，显微镜下可见到具特征性的多核巨细胞或核内病毒包涵体。
