背景
在具有免疫活性宿主中，最初暴露在非完整上皮化皮肤或粘膜部位后，单纯疱疹病毒2型(HSV2)引起相关背根神经节慢性潜伏感染。受感染者的临床疾病范围广泛；一些患者经历无症状血清转化，而另一些患者一年有10次或更多次复发。虽然病毒重新活化和症状性疾病的潜在机制尚不清楚，但再活化部位的临床表现谱被认为主要取决于宿主的适应性免疫反应，而不是内在的病毒因素。基于人的研究以及数学建模和动物研究表明，细胞介导的免疫，包括组织驻留记忆CD8+和浸润或驻留记忆CD4+T细胞，是局部病毒控制的重要因素。
简介
年3月30日，来自美国华盛顿大学医学部的LawrenceCorey及其团队在JClinInvest（IF:11.）杂志上发表名为Bcells,antibody-secretingcellsandvirus-specificantibodiesrespondtoherpessimplexvirus-2reactivationinskin的研究[1]。
主要结果
在16名参与者中，14名是妇女；平均年龄为50岁(范围18-66岁)。所有16名受试者的HSV2病毒血清反应均呈阳性，6名受试者还具有HSV1抗体。最常见的活检部位为臀部(N=10)。在临床明显的HSV2病变期间和愈合期间进行了活检，每人共进行5或6次活检。在病变时或从手臂(N=7)或对侧生殖器皮肤(N=9)愈合后8周，对未受累皮肤进行对照部位活检。连续活检没有并发症。
免疫荧光检测组织中B细胞的组织学
通过CD20和CD79b的双重免疫荧光染色，在11人的65例活动性和早期愈合HSV2病变穿刺活检中的47例中鉴定出B细胞，其中从活动性病变至愈合后8周的全套5或6例活检可用于IF。
通过双重染色定量并确认CD20的可靠性后，在组织活检中使用CD20独立识别B细胞。每个活检切片中存在的CD20+CD79b+细胞数量因人和时间点而异。总体而言，B细胞在病变和早期愈合期间更常见，与T细胞浸润类似。在临床静止期间的活组织检查中，它们并不常见，在16个对照部位的活组织检查中，从未受损伤的生殖器皮肤或手臂中仅发现了3个(图1A)。
在组织学上，B细胞通过CD20IF在真皮上部(通常在表面上皮的m范围内)中鉴定，但在真皮-表皮连接处(DEJ)(图1A)中从未发现，在该处经常发现CD8+T细胞(图1B)，或在表皮的多层中从未发现，与小鼠中的组织学一致。
图1.HSV2再活化期间，抗原幼稚的CD20+B细胞和IgGRNA+细胞浸润病变区域皮肤，但未累及皮肤
为了进一步确认组织活检中ASCs的表型，我们评估了转录因子Blimp-1和IRF4的存在。Blimp-1由PRDM1基因编码。在大多数但不是所有IgGRNA+细胞中均检测到PRDM1和IgGRNA的证据(图2A)。双重FISH进一步证实了ASCs的存在，表达转录因子IRF4，与幼稚和记忆B细胞相比，在ASCs中上调5-10倍，还诱导Blimp-1表达。通过共聚焦显微镜，经常观察到IRF4的核生成与IgGRNA转录物共定位(图2B)。
图2.在对HSV2病毒再活化的组织免疫应答期间，表达高水平IgGRNA的细胞浸润生殖器皮肤
我们对B细胞的空间定位进行了详细的研究，以确定其与小毛细血管的接近程度。与冯-维伦布兰德因子(vWF)共染色表明，FISH鉴定的IgGRNA+细胞有时接近小毛细血管，但通常不包含在血管结构中(图3A)。观察到许多IgGRNA+细胞簇，但没有相关内皮细胞的证据(图1C，图3B，3C)。有些簇似乎主要包含T细胞，如图1D和上文所述，而其他簇似乎主要包含ASC，如图3C所示有少量T细胞。IgGRNA+细胞簇通常位于真皮中(与DEJ病无关)，同时含有CD8+(图3B，通过FISH和IF在连续切片上观察)和CD4+(图3C，通过双探针FISH观察)T细胞。
图3.IgGRNA+细胞与其他组织结构和细胞类型的关系
SV2再活化和皮肤愈合过程中B细胞反应的动力学
总体上，B细胞和ASC浸润的大小和密度(图4A和B)在急性活化期最大，即在临床损伤和早期愈合期间。在接受检测的14名患者中，12名在接受病变活检时通过PCR检测到HSV2，在7名和16名患者的首次愈合活检中也检测到。在大多数人中，当存在生殖器病变时，在活检中观察到CD20+B细胞密度最高；中位密度18.4个细胞/mm2(N=8，范围2.6-46.0个细胞/mm2)。在三名受试者中，CD20+细胞的密度在愈合时达到峰值，约在病变开始后10天(图4A)，中位值为16.1个细胞/mm2(范围1.5-37.4个细胞/mm2)。为了确定CD20+B细胞的峰值密度是在活动/早期愈合时还是在愈合后期的时间点更高，比较了每名受试者的这些活组织检查的最大值。通过Wilcoxon符号秩次检验，溃疡或愈合病变的最大CD20+细胞密度高于愈合后2、4或8周活检的最大值(p=0.)。
图4.根据活检类型(左)和随着时间推移(右)，HSV2再活化和组织愈合期间B和T细胞进入生殖器皮肤的迁移动力学
生殖器组织中HSV2特异性抗体的检测及动力学研究
通过IF检测组织中人IgG抗体(IgG)。与B细胞一样，IgG在病变的真皮上部和早期愈合组织活检切片中检测到的程度最大，而在未受累处活检中检测不到(图5A)。在活性HSV2囊泡和HSV2相关上皮细胞坏死区域的独特活检中，可检测到IgG与HSV抗原共同定位于囊泡内，且在坏死区域不太明显(图5B)。同型对照、分离的二抗或在if前使用5%人血清阻断组织均未检测到荧光。因此，我们假设在HSV2再活化期间在皮肤中检测到的IgG(图5)是由抗原特异性过程产生的，例如由局部迁移的B细胞产生，因此其浓度高于非HSV特异性抗体。
图5.在对HSV2再活化的组织免疫应答期间可检测到抗体，其抗体量随时间变化
结论及展望
总之，我们已证明B细胞和ASCs存在于由生殖器区域皮肤中的HSV2再活化引起的炎性浸润中。表型检测表明，ASC大部分为浆细胞，但也可能包括浆母细胞，许多(如果不是大多数的话)CD20+细胞是无抗原的。CD20+细胞(IgG+细胞较少)的组织浸润和流出动力学与T细胞研究中所见一致，但因人而异。这种明显的可变性可能部分是由于可用于研究的样本量有限，但是，它与HSV2特异性抗体的相对浓度相似。组织中HSV2特异性抗体的浓度独立于血清中HSV2特异性抗体的浓度而变化，这表明存在导致HSV2特异性抗体局部产生或募集的局部机制。我们认为B细胞和ASCs在人类皮肤对HSV2病毒再活化的免疫反应中所起的作用尚未得到充分认识。
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